卵巢組織內(nèi)富含卵泡、間質(zhì)細(xì)胞及基質(zhì)纖維，機(jī)械研磨易損傷顆粒細(xì)胞，酶解不當(dāng)則會導(dǎo)致活率驟降。傳統(tǒng)搖床方案因無法標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)速、溫度與時間，批次間重復(fù)性差、細(xì)胞碎片多，制備過程既耗力又耗時。上海凈信JX-CKSM-4WK磁珠款單細(xì)胞懸液制備儀，以磁珠剪切 + 酶離者酶解的組合策略，讓小鼠卵巢單細(xì)胞懸液制備一步到位！
卵巢單細(xì)胞制備，為何這么難？
1. 研磨損傷大：機(jī)械剪切力過強(qiáng)，顆粒細(xì)胞破膜率高，臺盼藍(lán)染色死細(xì)胞比例上升。
2. 酶解不穩(wěn)定：搖床轉(zhuǎn)速、溫度難以精控，消化時間憑經(jīng)驗，批次重復(fù)性差。
3. 碎片干擾多：基質(zhì)纖維斷裂產(chǎn)生大量細(xì)胞碎片，下游流式/測序質(zhì)控繁瑣。
4. 操作者依賴：傳統(tǒng)方案高度依賴操作者經(jīng)驗，換人后數(shù)據(jù)不可復(fù)現(xiàn)。
小鼠懸液單細(xì)胞制備完整流程
1. 儀器預(yù)備：連接JX-CKSM-4WK單細(xì)胞制備儀的電源，開機(jī)后預(yù)熱，在主菜單選取卵巢專用程序，待機(jī)備用。
2. 試劑解凍：酶離者消化酶（MJ022 通用解離酶）與終止液（MJ102）提前用流動涼水解凍，充分混勻；切勿使用溫?zé)崴苊饷富钚該p失。
3. 取材與預(yù)處理：小鼠頸椎脫臼處死后迅速取出雙側(cè)卵巢，置于盛有 PBS 的培養(yǎng)皿中冰上保存，用眼科剪將組織充分剪碎，減小酶解阻力。
4. 裝管加酶：組織碎塊用 PBS 洗滌后，轉(zhuǎn)入消化管；加入酶離者消化酶，確保組織完全浸沒。
5. 儀器運(yùn)行：將消化管固定于模塊，點擊運(yùn)行；JX-CKSM-4WK 磁珠以程序化方式旋切組織，同步完成機(jī)械勻漿與酶解。過程中可隨時暫停查看進(jìn)度。
6. 過濾與終止：程序結(jié)束后，用濾網(wǎng)過濾消化液；按消化液：終止液 = 1:1 加入MJ102終止液，立即中止酶反應(yīng)。
7. 裂紅與碎片去除：濾液離心，棄上清；沉淀中加入MJ103 紅細(xì)胞裂解液，冰上孵育幾分鐘后，隨后加入PBS+MJ101 碎片去除劑，離心棄上清，PBS 洗滌細(xì)胞。
8. 重懸 & 計數(shù)：加入適量無菌 PBS 輕柔重懸底部細(xì)胞沉淀，即得單細(xì)胞懸液。顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞計數(shù)儀檢測活率與濃度。
實驗結(jié)果分析
鏡下觀察顯示細(xì)胞分散良好、形態(tài)完整，無明顯聚團(tuán)或細(xì)胞碎片堆積。細(xì)胞計數(shù)儀結(jié)果確認(rèn)活細(xì)胞比例穩(wěn)定，滿足下游流式細(xì)胞術(shù)及單細(xì)胞測序建庫要求。
實驗操作的注意事項
1. 酶離者單細(xì)胞試劑盒溶解后須在低溫保存，使用前用涼水解凍，切勿使用溫?zé)崴悦饷富钚韵陆怠?/span>
2. 取材后全程置于冰上操作，縮短離體時間，維持細(xì)胞活性。
3. 洗滌次數(shù)不宜過多、時間不宜過長，避免細(xì)胞機(jī)械損失，建議 PBS 洗滌不超過 2 次。
4. 濾網(wǎng)過濾后，用 PBS 輕柔沖洗濾膜，最大化回收單細(xì)胞。
5. 消化完成后應(yīng)盡快進(jìn)行下游實驗，如樣本組織需短期保存，可使用 MJ104 酶離者組織保存液維持活性。
