小鼠前列腺腫瘤組織屬于致密、纖維含量高的類型樣品。手動研磨特別考驗手法；這次我們應用機器自動化解離，看看這處理效果到底能不能打——實驗全程使用上海凈信JX-DLDXB-4單細胞懸液制備儀。
實驗前的準備
1. 樣本：小鼠前列腺腫瘤組織，約100mg。腫瘤組織比正常組織更致密，剪塊的時候盡量切小一點，別整塊往里塞，不然解離效率會受影響。
2. 試劑：配套單細胞懸液制備試劑盒。試劑盒必須放在低溫保存，做實驗前提前拿出來解凍，千萬別臨時抱佛腳。試劑盒里一般包含消化酶和緩沖液，按說明書比例配好就行。
3. 耗材：手術剪刀、眼科鑷、培養皿、移液槍、離心管、濾網。
4. 實驗儀器：凈信JX-DLDXB-4單細胞懸液制備儀。這款機器是四通道設計，可以同時處理多個樣本，通量不錯。儀器自帶幾種預設程序，針對不同的組織類型做了優化，可以直接調用，不用自己從零摸索參數。
小鼠腫瘤組織單細胞懸液制備的實驗操作步驟
整個實驗操作過程其實不復雜，我這次用的是儀器內置的"小鼠腫瘤程序1"，具體流程如下：
1. 樣本處理：先把小鼠前列腺腫瘤組織取出來，放在培養皿里，用手術剪刀剪成小塊。這一步越碎越好，但也不用太強迫癥，機器后面還有機械解離，主要讓消化酶能充分滲透進去就行。剪完后轉移到消化管中，加入配好的消化酶混合液。
2. 上機解離：將消化管裝入儀器的固定槽位，確認管蓋卡緊。在觸摸屏上選擇"小鼠腫瘤程序1"，這個程序的溫度和轉速曲線是針對腫瘤組織優化過的，不用自己調。點開始后機器會自動升溫，然后進行恒溫酶解，同時伴隨機械震蕩，讓組織在酶和機械力的雙重作用下逐漸打散。
3. 過濾與清洗：解離完成后取出消化管，先用移液槍輕輕吹打幾下，把管壁上粘的細胞沖下來。然后用細胞濾網過濾，把沒解離開的組織碎片和細胞團塊篩掉。過濾后的細胞懸液轉入離心管，低速離心清洗，去掉多余的消化酶和碎片。
4. 重懸與計數：清洗后的細胞沉淀用PBS或培養基重懸，輕輕吹打混勻。然后用血球計數板或者自動細胞計數儀測一下濃度和活率，確保后續上流式的細胞數量夠用。活率一般要在85%以上，太低的話分選效果會打折扣。
單細胞懸液制備過程中的實驗注意事項
做下來有幾個地方容易翻車，需要提前避一下雷：
1. 試劑盒保存和解凍：試劑盒一定要低溫凍存，不能反復凍融。建議提前一晚放到4℃解凍，或者實驗當天拿出來室溫化凍。反復凍融會導致酶活性下降，解離效果直接打折扣。
2. 組織塊大小：別嫌麻煩，組織塊一定要剪碎。大塊組織進去，機器再強也啃不動，最后過濾時堵濾網，細胞得率低，還耽誤時間。
3. 清洗要克制：清洗是為了去掉碎片和殘留酶，但次數太多會損失細胞。尤其腫瘤組織解離出來的細胞相對脆弱，離心轉速過高或者時間過長都會導致細胞破裂。
4. 程序選擇：JX-DLDXB-4單細胞制備儀內置了多種程序，對應不同組織類型。小鼠腫瘤樣本就用"小鼠腫瘤程序1"，別套用其他程序。程序內部參數包括溫度曲線、振蕩頻率、時間都是匹配好的，自己亂調反而容易出問題。
結果總結
這次實驗用機器解離下來的細胞懸液，整體狀態比我之前手動研磨的要均勻很多。細胞得率穩定，碎片率明顯降低，最重要的是重復性好。手動研磨每次結果波動挺大，全看手感和運氣，機器做完幾次，數據之間的偏差小了很多，后續上流式分選也省了不少心。
上海凈信JX-DLDXB-4單細胞懸液制備儀，對于前列腺腫瘤這種致密組織，解離效率確實在線。預設程序省掉了調參的時間，四通道并行處理，通量也夠用。如果你實驗室也做小鼠腫瘤組織的單細胞解離，這臺機器可以列入考慮清單，至少能把重復性差這個老大難問題給解決掉。
