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實驗案例
首頁 實驗案例 全自動組織解離儀助力小鼠子宮單細胞懸液制備,細胞活率高達86%!
2026/7/6 17:24:37
全自動組織解離儀助力小鼠子宮單細胞懸液制備,細胞活率高達86%!
來源:上海凈信

子宮組織富含平滑肌、內膜上皮細胞及大量血管,結構致密,細胞間連接緊密。傳統機械研磨方式容易破壞細胞膜完整性,導致活率偏低;而普通胰酶配方消化時間難以把控,過度消化同樣造成大量細胞損失。

通用組織消化酶MJ022可為多種實驗組織定制配方,溫和高效,在保證消化效率的同時較大程度低維持細胞活性,適用于子宮、肌肉、皮膚等多種纖維性/軟組織。

實驗材料清單

1. 實驗對象:小鼠子宮組織

2. 消化試劑:MJ022 通用消化酶

3. 終止試劑:MJ102 酶解終止液

4. 裂紅試劑:MJ103 紅細胞裂解液 + FBS 200 μl

5. 純化試劑:MJ101 去碎片試劑

6. 耗材:消化管、濾網、離心機

7. 緩沖液:無菌 PBS(漂洗、重懸用)

8. 檢測試劑:AOPI 染料 + 自動細胞計數儀

單細胞懸液制備儀對小鼠子宮組織懸液制備的實驗步驟詳解

1. 開機準備:連接儀器電源,打開開關,選好子宮對應程序備用。

2. 試劑解凍:將MJ022消化酶和MJ102終止液提前備好。(消化酶溶解后建議分裝成小瓶,避免反復凍融影響活性)切勿用溫熱水,避免酶活性提前下降。

3. 取材:小鼠頸椎脫臼處死,迅速取出子宮,置于含 PBS 的培養皿中,放在冰上保存,減少細胞損傷。

4. 剪碎 · 加酶:用 PBS 漂洗子宮組織,眼科剪充分剪碎,放入消化管,加入MJ022 通用消化酶。

5. 核心消化步驟:將消化管放至凈信單細胞懸液制備儀模塊上,選擇“子宮”對應程序,點擊運行。中途可暫停查看消化狀態,判斷消化充分后及時停止,避免過消化。

6. 過濾 · 終止消化:用濾網過濾消化液,去除未消化組織塊;按比例加入MJ102終止液,快速滅活酶活性。

7. 離心 · 裂紅 · 去碎片:離心后棄上清,加入紅細胞裂解液,冰上裂紅幾分鐘,加入PBS+MJ101去碎片試劑,再次離心棄上清,洗滌細胞

8. 重懸 · 獲得單細胞懸液:加入少量無菌 PBS,輕柔吹打混勻管底沉淀,即得到高活性單細胞懸液,可用于后續實驗。

9. AOPI 染色 · 細胞計數:AOPI 雙熒光染色后上自動細胞計數儀檢測,讀取細胞活率及濃度數據。

實驗注意事項

1. 試劑保存:MJ022 消化酶干粉時可4°C保存,溶解后須低溫保存。

2. 裂紅時間嚴格把控:MJ103 裂紅液冰上作用時間控制在幾分鐘,時間過長會對目的細胞產生影響,時間過短則裂紅不徹底。

3. 避免過度洗滌:清洗單細胞懸液次數不宜過多、時間不宜過長,否則會造成細胞損失,影響最終收獲量。

4. 低溫操作:取材后,除了儀器消化 37°C,其余操作組織始終置于冰上,離心、重懸等步驟均在低溫條件下進行,最大程度保障細胞活性。

實驗結果分析

AOPI 細胞計數儀檢測結果:活率 86.01%。使用凈信單細胞懸液制備儀可獲得高活性單細胞懸液,滿足流式細胞術、單細胞測序等高要求下游實驗的樣本需求。

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