眼角膜組織研磨的難點(diǎn)在于其內(nèi)部具有致密的膠原纖維基質(zhì)，組織質(zhì)地堅(jiān)韌，常規(guī)勻漿或低溫研磨往往難以實(shí)現(xiàn)充分、均勻的破碎。如果樣品處理不充分，還可能影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。針對(duì)這一實(shí)驗(yàn)問題，本次實(shí)驗(yàn)采用上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀處理眼角膜組織，通過儀器預(yù)冷、液氮預(yù)浸泡及低溫研磨相結(jié)合的方式，對(duì)眼角膜組織開展研磨測(cè)試，探索適用于此類堅(jiān)韌眼組織樣品前處理研磨的解決方案。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>本次實(shí)驗(yàn)旨在驗(yàn)證上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀對(duì)眼角膜組織的破碎效果，解決組織質(zhì)地堅(jiān)韌、常規(guī)研磨不易充分破碎的研磨問題。通過液氮預(yù)浸泡使堅(jiān)韌的膠原基質(zhì)脆化，在-50℃低溫環(huán)境下進(jìn)行高頻間歇研磨，在高效破碎組織的同時(shí)抑制核酸酶與蛋白酶活性，保護(hù)核酸、蛋白等目標(biāo)分子不被降解，并避免手工剪碎帶來的污染風(fēng)險(xiǎn)。
冷凍研磨儀對(duì)眼角膜組織前處理研磨的實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 樣品準(zhǔn)備：準(zhǔn)備新鮮或凍存的眼角膜組織
2. 預(yù)冷：提前將凈信冷凍研磨機(jī)JXFSTPRP-CLN打開預(yù)冷，調(diào)節(jié)參數(shù)至-50攝氏度，帶程序顯示至-50攝氏度即可開始運(yùn)行
3. 裝樣：先放氧化鋯研磨珠，用預(yù)冷的鑷子將完整的眼角膜組織放入研磨管中
4. 液氮預(yù)浸泡：將裝好樣的研磨管浸泡液氮10分鐘以上，再取出，迅速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研磨適配器中
5. 對(duì)儀器前處理研磨運(yùn)行的程序參數(shù)進(jìn)行設(shè)置，啟動(dòng)儀器開始樣品研磨。
6. 帶程序停止后，即可取出樣品管。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1. 眼角膜組織要是完整的。不要剪碎，因?yàn)榧羲橐自斐蓸悠肺廴尽?/span>
2. 樣品放置在研磨管內(nèi)時(shí)需要珠子上下包圍，樣品在中間。
處理前后對(duì)比照片：（附未用液氮浸泡過研磨失敗的效果圖）
研磨前樣品質(zhì)地非常堅(jiān)韌 未用液氮浸泡過，樣品研磨失敗
用液氮泡過之后樣品研磨非常成功，樣品研磨非常細(xì)，可用槍輕松吸出
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，眼角膜組織經(jīng)液氮浸泡10分鐘以上后，配合冷凍研磨儀在低溫條件下循環(huán)研磨，可獲得非常細(xì)膩的勻漿效果，可用移液槍輕松吸出，滿足后續(xù)的實(shí)驗(yàn)要求。而未做液氮預(yù)處理的樣品則研磨失敗。該研磨方案為眼組織等堅(jiān)韌樣本的前處理研磨提供了高效、可靠的技術(shù)參考。
