眼角膜組織研磨的難點在于其內(nèi)部具有致密的膠原纖維基質(zhì)，組織質(zhì)地堅韌，常規(guī)勻漿或低溫研磨往往難以實現(xiàn)充分、均勻的破碎。如果樣品處理不充分，還可能影響后續(xù)實驗操作。針對這一實驗問題，本次實驗采用上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀處理眼角膜組織，通過儀器預冷、液氮預浸泡及低溫研磨相結(jié)合的方式，對眼角膜組織開展研磨測試，探索適用于此類堅韌眼組織樣品前處理研磨的解決方案。
實驗目的：本次實驗旨在驗證上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀對眼角膜組織的破碎效果，解決組織質(zhì)地堅韌、常規(guī)研磨不易充分破碎的研磨問題。通過液氮預浸泡使堅韌的膠原基質(zhì)脆化，在-50℃低溫環(huán)境下進行高頻間歇研磨，在高效破碎組織的同時抑制核酸酶與蛋白酶活性，保護核酸、蛋白等目標分子不被降解，并避免手工剪碎帶來的污染風險。
冷凍研磨儀對眼角膜組織前處理研磨的實驗步驟：
1. 樣品準備：準備新鮮或凍存的眼角膜組織
2. 預冷：提前將凈信冷凍研磨機JXFSTPRP-CLN打開預冷，調(diào)節(jié)參數(shù)至-50攝氏度，帶程序顯示至-50攝氏度即可開始運行
3. 裝樣：先放氧化鋯研磨珠，用預冷的鑷子將完整的眼角膜組織放入研磨管中
4. 液氮預浸泡：將裝好樣的研磨管浸泡液氮10分鐘以上，再取出，迅速轉(zhuǎn)移至預冷的研磨適配器中
5. 對儀器前處理研磨運行的程序參數(shù)進行設置，啟動儀器開始樣品研磨。
6. 帶程序停止后，即可取出樣品管。
實驗注意事項：
1. 眼角膜組織要是完整的。不要剪碎，因為剪碎易造成樣品污染。
2. 樣品放置在研磨管內(nèi)時需要珠子上下包圍，樣品在中間。
處理前后對比照片：（附未用液氮浸泡過研磨失敗的效果圖）
研磨前樣品質(zhì)地非常堅韌 未用液氮浸泡過，樣品研磨失敗
用液氮泡過之后樣品研磨非常成功，樣品研磨非常細，可用槍輕松吸出
實驗結(jié)果表明，眼角膜組織經(jīng)液氮浸泡10分鐘以上后，配合冷凍研磨儀在低溫條件下循環(huán)研磨，可獲得非常細膩的勻漿效果，可用移液槍輕松吸出，滿足后續(xù)的實驗要求。而未做液氮預處理的樣品則研磨失敗。該研磨方案為眼組織等堅韌樣本的前處理研磨提供了高效、可靠的技術(shù)參考。
