一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
將小鼠唾液腺組織制備成高質(zhì)量單細(xì)胞懸液，為后續(xù)單細(xì)胞測(cè)序（scRNA-seq）、流式細(xì)胞分選及細(xì)胞功能研究等實(shí)驗(yàn)提供合格的細(xì)胞樣本。
高效消化：專(zhuān)用程序5分鐘完成，減少樣本損失
高活性細(xì)胞：全程冰上操作，最大程度保護(hù)細(xì)胞活力
智能儀器：內(nèi)置唾液腺專(zhuān)屬程序，參數(shù)精確可控護(hù)細(xì)胞活力
質(zhì)量可視化：AOPI染色+細(xì)胞計(jì)數(shù)儀即時(shí)驗(yàn)證結(jié)果
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.儀器準(zhǔn)備：連接凈信單細(xì)胞制備儀電源，打開(kāi)開(kāi)關(guān)，選擇唾液腺專(zhuān)屬程序備用。
2.試劑解凍：將消化酶提前配好（酶離者：干粉、溶解液全部混合），使試劑混合均勻，終止液用涼水解凍。
3.取材：小鼠斷頸處死后，迅速取出唾液腺，置于盛有 PBS 的培養(yǎng)皿中，全程放在冰上保存
4.剪碎入管：將唾液腺組織用 PBS 洗滌后，用眼科剪剪碎，放入 2 ml 消化管中，加入約 1 ml 消化酶。
5.上機(jī)運(yùn)行：將消化管放到儀器模塊上，選擇對(duì)應(yīng)的唾液腺程序，點(diǎn)擊運(yùn)行開(kāi)始消化。
6.消化完成：約 5 分鐘后消化完成，停止運(yùn)行，立即取出消化管。
7.過(guò)濾&終止：用 70 μm 濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞液，按 1:1 比例加入終止液終止消化，防止過(guò)度消化損傷細(xì)胞。
8.離心 & 去碎片：過(guò)濾后的懸液離心重懸，棄上清；加入 2 ml 裂紅溶液（含 200 μl FBS），冰上裂紅 3-5 min；再加入 500 μl PBS + 1 ml 碎片去除劑，離心棄上清，洗細(xì)胞兩次，有效去除紅細(xì)胞及細(xì)胞碎片。
9.重懸得樣：最后加入少量無(wú)菌 PBS，充分吹打混勻底部沉淀，即可獲得高質(zhì)量單細(xì)胞懸液，準(zhǔn)備進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
10.質(zhì)控計(jì)數(shù)：取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行 AOPI 染色，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞濃度與活率，直觀評(píng)估樣本質(zhì)量。
三、細(xì)胞技術(shù)儀檢測(cè)數(shù)據(jù)
通過(guò)凈信單細(xì)胞制備系統(tǒng)制備的小鼠唾液腺單細(xì)胞懸液，經(jīng) AOPI 染色后在細(xì)胞計(jì)數(shù)儀下觀察，可獲得分散均勻、形態(tài)完整的單細(xì)胞群體，細(xì)胞活率高，碎片率低，充分滿(mǎn)足單細(xì)胞測(cè)序上機(jī)要求。
四、注意事項(xiàng)
1、酶離者試劑盒溶解后，必須在?20°C低溫保存；使用前用涼水緩慢解凍，切勿使用溫?zé)崴苊饷富钚詥适А?/span>
2、全程保持冰上操作，取材后應(yīng)盡快處理組織，減少細(xì)胞活性損失。
3、洗滌步驟不宜次數(shù)過(guò)多或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)造成細(xì)胞機(jī)械損失，影響最終產(chǎn)量和活率。
4、過(guò)濾時(shí)動(dòng)作輕柔，避免對(duì)濾網(wǎng)施加過(guò)大壓力，以保留更多完整細(xì)胞。
五、總結(jié)
唾液腺含有豐富的腺泡細(xì)胞、導(dǎo)管細(xì)胞及免疫細(xì)胞，是研究腺體發(fā)育與疾病的重要模型。凈信單細(xì)胞制備系統(tǒng)憑借預(yù)置的唾液腺專(zhuān)屬消化程序，結(jié)合經(jīng)過(guò)優(yōu)化的酶學(xué)配方，實(shí)現(xiàn)了從取材到單細(xì)胞懸液的全流程標(biāo)準(zhǔn)化操作，有效降低了批次間差異，讓每一次實(shí)驗(yàn)都能穩(wěn)定可靠。
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